Создание штамма – продуцента бактериальной пуриннуклеозидфосфорилазы, слитой с человеческим аннексином А5
https://doi.org/10.29235/1029-8940-2020-65-2-239-244
Аннотация
Бактериальная пуриннуклеозидфосфорилаза (ПНФаза), в отличие от ПНФазы млекопитающих, способна подвергать фосфоролитическому расщеплению аденозин и его производные с образованием свободных азотистых оснований. Это позволяет использовать ПНФазу бактерий (при условии решения проблемы доставки этого фермента или его гена в клетки-мишени) в качестве пролекарственной терапии рака. Кроме того, ПНФаза в ложе опухоли может разрушать внеклеточный аденозин, который, как известно, защищает раковые клетки от противоопухолевого иммунитета.
В результате проведенного исследования сконструирован новый штамм Escherichia coli, продуцирующий химерный белок, молекула которого состоит из гомологичной ПНФазы, слитой с человеческим аннексином А5 – белком, проявляющим сродство к раковым клеткам. Продуцирующая способность штамма – продуцента химерного белка «Аннексин-ПНФаза» в отношении ПНФазы, рассчитанная по результатам реакции фосфоролиза инозина, составила 10 200 ед/мл культуральной жидкости. Полученный штамм предназначен для создания технологии получения новых противоопухолевых препаратов.
Ключевые слова
рекомбинантный штамм,
химерный белок,
человеческий аннексин А5,
пуриннуклеозидфосфорилаза,
Escherichia coli
При поддержке: Работа выполнена в рамках задания 3.32 Государственной программы научных исследований «Микробные биотехнологии», 2016–2020 гг.
Об авторах
А. Б. Булатовский
Институт микробиологии НАН Беларуси
Беларусь
Беларусь
Булатовский Алексей Борисович – мл. науч. сотрудник
ул. Купревича, 2, 220141, г. Минск
А. И. Зинченко
Институт микробиологии НАН Беларуси
Беларусь
Беларусь
Зинченко Анатолий Иванович – член-корреспондент, д-р биол. наук, профессор, заведующий лабораторией
ул. Купревича, 2, 220141, г. Минск
Список литературы
1. Expression, purification, and characterization of recombinant purine nucleoside phosphorylase from Escherichia coli / J. Lee [et al.] // Protein Expr. Purif. – 2001. – Vol. 22, N 2. – Р. 180–188. https://doi.org/10.1006/prep.2001.1437
2. Portsmouth, D. Suicide genes for cancer therapy / D. Portsmouth, J. Hlavaty, M. Renner // Mol. Aspects Med. – 2007. – Vol. 28, N 1. – P. 4–41. https://doi.org/10.1016/j.mam.2006.12.001
3. Krais, J. J. Purine nucleoside phosphorylase targeted bу Annexin V to breast cancer vasculature for enzyme prodrug therapy / J. J. Krais, О. De Crescenzo, R. G. Harrison // PLoS ONE. – 2013. – Vol. 8, N 10. – P. е76403. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0076403
4. In vivo gene therapy of cancer with Е. coli purine nucleoside phosphorylase / W. В. Parker [et аl.] // Hum. Gene Ther. – 1997. – Vol. 8, N 14. – Р. 1637–1644. https://doi.org/10.1089/hum.1997.8.14-1637
5. Синтез флударабин-5′-монофосфата с использованием бактериальных рекомбинантных ферментов / А. И. Береснев [и др.] // Вес. Нац. акад. навук Беларусі. Сер. бiял. навук. – 2017. – Т. 62, № 1. – С. 7–15.
6. In search of a novel target – phosphatidylserine exposed by non-apoptotic tumor cells and metastases of malignancies with poor treatment efficacy / S. Riedl [et al.] // Biochim. Biophys. Acta. Biomembranes. – 2011. – Vol. 1808, N 11. – P. 2638– 2645. https://doi.org/10.1016/j.bbamem.2011.07.026
7. Sharma, B. Phosphatidylserine: a cancer cell targeting biomarker / B. Sharma, S. S. Kanwar // Semin. Cancer Biol. – 2018. – Vol. 52, Pt. 1. – P. 17–25. https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2017.08.012
8. Sambrook, J. F. Molecular cloning: a laboratory manual / J. F. Sambrook, D. W. Russell. – 3rd ed. – New York : Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. – 2100 p.
9. Quan, J. Circular polymerase extension cloning of complex gene libraries and pathways / J. Quan, J. Tian // PLoS ONE. – 2009. – Vol. 4, N 7. – P. e6441. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0006441
10. Walker, J. M. The protein protocol handbook / J. M. Walker. – 2nd ed. – Totowa : Humana Press, 2002. – 15 p.
11. Vaupel, P. Hypoxia-driven adenosine accumulation: a crucial microenvironmental factor promoting tumor progression / P. Vaupel, A. Mayer // Advances in Experimental Medicine and Biology / ed. : C. E. Elwell, T. S. Leung, D. K. Harrison. – New York, 2016. – Vol. 876 : Oxygen Transport to Tissue. – P. 177–183.
12. Зинченко, А. И. Аденозин как потенциальная мишень для биотерапии рака / А. И. Зинченко // Вес. Нац. акад. навук Беларусi. Сер. бiял. навук. – 2016. – Т. 61, № 4. – С. 118–128.
Рецензия
Просмотров: 535
Послать статью по эл. почте 
