Оценка экспрессии генов TH и PHOX2B с использованием ПЦР в режиме реального времени для диагностики метастатического поражения костного мозга при нейробластоме

Несмотря на применение комплексного лечения, выживаемость пациентов группы высокого риска при нейробластоме не превышает 50 %, при этом основная причина смертельных исходов – развитие рецидива забо- левания. Ключевыми факторами неблагоприятного прогноза в отношении выживаемости и частоты развития реци- дивов являются поражение костного мозга (КМ), а также наличие минимальной остаточной болезни на различных этапах терапии.

Наиболее перспективным методом, позволяющим с высокой чувствительностью и специфичностью (за счет комбинации молекулярных маркеров) выявлять клетки нейробластомы в образцах КМ является ПЦР в режиме реального времени. В данной работе нами разработан метод оценки экспрессии генов TH и PHOX2B для детекции метастатиче- ского поражения КМ при нейробластоме. Разработанный метод обладает высокой чувствительностью (1·10–4) и спе- цифичностью к опухолевым клеткам. Экспрессия генов TH и PHOX2B оценена у 67 пациентов детского возраста с нейробластомой на момент постановки диагноза. Показано наличие клинического значения оценки экспрессии генов TH и PHOX2B, что проявляется достоверно худшими показателями общей и безрецидивной выживаемости в группе пациентов с гиперэкспрессией детектируемых генов. Разработанный метод может быть использован в кли- нической практике как для оценки степени поражения КМ, так и для стратификации пациентов по группам риска на момент постановки диагноза.

1. Hallet, A. A review and update on neuroblastoma / A. Hallet, H. Traunecker // Pediatr. Child Health. – 2012. – Vol. 22, N 3. – Р. 103–107. https://doi.org/10.1016/j.paed.2011.08.005

2. Szewczyk, K. Methods for detection of minimal residual disease in neuroblastoma pesiatric tumor / K. Szewczyk, W. Balwierz // Eur. J. Med. Technol. – 2017. – Vol. 2, N 15. – P. 23–28.

3. Cyclin D1, a novel molecular marker of minimal residual disease, in metastatic neuroblastoma / I. Y. Cheung [et al.] // J. Mol. Diagn. – 2007. – Vol. 9, N 2. – P. 237–241. https://doi.org/10.2353/jmoldx.2007.060130

4. Detecting minimal residual disease in neuroblastoma: the superiority of a panel of real-time quantitative PCR markers / J. Stutterheim [et al.] // Clin. Chem. – 2009. – Vol. 55, N 7. – P. 1316–1326. https://doi.org/10.1373/clinchem.2008.117945

5. Exploiting gene expression profiling to identify novel minimal residual disease markers of neuroblastoma / I. Y. Cheung [et al.] // Clin. Cancer Res. – 2008. – Vol. 14, N 21. – P. 7020–7027. https://doi.org/10.1158/1078-0432.ccr-08-0541

6. Minimal disease monitoring by QRT-PCR: guidelines for identification and systematic validation of molecular markers prior to evaluation in prospective clinical trials / V. Viprey [et al.] // J. Pathol. – 2008. – Vol. 216, N 2. – P. 245–252. https://doi.org/10.1002/path.2406

7. Pitfalls in detection of contaminating neuroblastoma cells by tyrosine hydroxylase RT-PCR due to catecholamineproducing hematopoietic cells / Z. Kuçi [et al.] // Anticancer Res. – 2006. – Vol. 26, N 3A. – P. 2075–2080.

8. PHOX2B is a novel and specific marker for minimal residual disease testing in neuroblastoma / J. Stutterheim [et al.] // J. Clin. Oncol. – 2008. – Vol. 26, N 33. – P. 5443–5449. https://doi.org/10.1200/JCO.2007.13.6531

9. Detecting minimal residual disease in neuroblastoma: the superiority of a panel of real-time quantitative PCR markers / J. Stutterheim [et al.] // Clin. Chem. – 2009. – Vol. 55, N 7. – P. 1316–1326. https://doi.org/10.1373/clinchem.2008.117945

10. Fraga, D. Real-time PCR overview and principles / D. Fraga, T. Meulia, S. Fenster // Curr. Protoc. Essent. Lab. Tech. – 2008. – Vol. 1. – P. 10.3.1–10.3.34. https://doi.org/10.1002/9780470089941.et1003s08