Молекулярно-генетическая природа муковисцидоза -наследственного заболевания человека

Проведен молекулярно-генетический анализ ДНК больного муковисцидозом с целью определения природы мутации, лежащей в основе данного заболевания. ДНК была получена из фибробластов больного муковисцидозом согласно общепринятым методикам. Сконструированы праймеры к фрагменту ДНК в 10-м экзоне гена CFTR, в котором локализована одна из часто встречаемых мутаций - F508del, обусловливающая муковисцидоз. С помощью ПЦР-амплификации получен фрагмент ДНК, в котором содержится данная мутация. Электрофорез амплифицированного материала выявил один продукт ДНК размером около 153 пар нуклеотидов. Методом секвенирования по Сэнгеру установлена природа и последовательность нуклеиновых оснований выделенного фрагмента ДНК. Сравнение данных о нуклеотидной последовательности, полученных после секвенирования фрагмента у больного муковисцидозом, с аналогичными данными здорового человека показало наличие мутации на уровне 10-го экзона в положении 1521-1523 кодирующей последовательности гена CFTR, представляющей собой выпадение трех пар нуклеотидов, которая, по общепринятым представлениям, относится к мутации F508del. Анализ данных секвенирования позволил отнести данную мутацию к разряду компаудных гетерозигот.

1. Identification of the cystic fibrosis gene: cloning and characterization of complementary DNA / R. Riordan [et al.] // Science. - 1989. - Vol. 245, N 4922. - P. 1066-1073. https://doi.org/10.1126/science.2475911

2. Mutation analysis and haplotype correlation for 139 cystic fibrosis patients from the Nebraska Regional Cystic Fibrosis Center / M. D. Traystman [et al.] // Human Mutation. - 1993. - Vol. 2, N 1. - P. 7-15. https://doi.org/10.1002/humu.1380020103

3. From CFTR biology toward combinatorial pharmacotherapy: expanded classification of cystic fibrosis mutationsn / G. Veit [et al.] // Mol. Biol. Cell. - 2016. - Vol. 27, N 3. - P. 424-433. https://doi.org/10.1091/mbc.e14-04-0935

4. Correction of the AF508 mutation in the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator gene by zinc-finger nuclease homology-directed repair / C. M. Lee [et al.] // BioRes. Open Access. - 2012. - Vol. 1, N 3. - P. 99-108. https://doi.org/10.1089/biores.2012.0218

5. Tsui, L.-C. The cystic fibrosis gene: a molecular genetic perspective / L.-C. Tsui, R. Dorfman // Cold Spring Harbor Perspectives Med. - 2013. - Vol. 3, N 2. - P. a009472. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a009472

6. Экспериментальные подходы к таргетному редактированию гена CFTR с помощью CRISPR/Cas9 / С. А. Смир-нихина [и др.] // Вестн. Рос. гос. мед. ун-та. - 2018. - № 2. - С. 15-21. https://doi.org/10.24075/brsmu.2018.022

7. Лагодич, А. В. Методы анализа нуклеиновых кислот : учеб.-метод. пособие / А. В. Лагодич, О. В. Лагодич. -Минск : БГУ, 2013. - 47 с.