vestibИзвестия Национальной академии наук Беларуси. Серия биологических наукProceedings of the National Academy of Sciences of Belarus, Biological Series1029-89402524-230XThe Republican Unitary Enterprise Publishing House "Belaruskaya Navuka"10.29235/1029-8940-2025-70-4-271-283vestib-984Research ArticleСтатьиМикросателлитный анализ эмбриогенных линий ели европейской Picea abies (L.) Karst.Microsatellite analysis of embryogenic lines of the Norway spruce Picea abies (L.) Karst.ПадутовВ. Е.PadutovV. E.

Падутов Владимир Евгеньевич – член-корреспондент, д-р биол. наук, профессор, заведующий отделом.

ул. Пролетарская, 71, 246050, Гомель

Vladimir E. Padutov – Corresponding Member, D. Sc. (Biol.), Professor, Head of the Department, Forest Institute of the National Academy of Sciences of Belarus.

71, Proletarskaya Str., 246050, Gomel

forestgen@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9106-1877МожаровскаяЛ. В.MozharovskayaL. M.

Можаровская Людмила Валентиновна – канд. биол. наук, доцент, ст. науч. сотрудник.

ул. Пролетарская, 71, 246050, Гомель

Ludmila V. Mozharovskaya – Ph. D. (Biol.), Associate Professor, Senior Researcher, Forest Institute of the National Academy of Sciences of Belarus.

71, Proletarskaya Str., 246050, Gomel

milamozh@yandex.ruКулагинД. В.KulaginD. V.

Кулагин Дмитрий Валерьевич – науч. сотрудник.

ул. Пролетарская, 71, 246050, Гомель

Dmitriy V. Kulagin – Researcher, Forest Institute of the National Academy of Sciences of Belarus.

71, Proletarskaya Str., 246050, Gomel

aqua32@mail.ruПадутовА. В.PadutovA. V.

Падутов Александр Владимирович – науч. сотрудник.

ул. Пролетарская, 71, 246050, Гомель

Alexandr V. Padutov – Researcher, Forest Institute of the National Academy of Sciences of Belarus.

71, Proletarskaya Str., 246050, Gomel

apadutov@yandex.byКусенковаМ. П.KusenkovaM. P.

Кусенкова Марина Петровна – науч. сотрудник.

ул. Пролетарская, 71, 246050, Гомель

Marina P. Kusenkova – Researcher, Forest Institute of the National Academy of Sciences of Belarus.

71, Proletarskaya Str., 246050, Gomel

marinaggu@mail.ruИнститут леса Национальной академии наук БеларусиForest Institute of the National Academy of Sciences of Belarus202507112025704271283Copyright © Падутов В.Е., Можаровская Л.В., Кулагин Д.В., Падутов А.В., Кусенкова М.П., 20252025Падутов В.Е., Можаровская Л.В., Кулагин Д.В., Падутов А.В., Кусенкова М.П.Padutov V.E., Mozharovskaya L.M., Kulagin D.V., Padutov A.V., Kusenkova M.P.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestibio.belnauka.by/jour/article/view/984

Соматический эмбриогенез (как метод микроклонального размножения) может быть использован для промышленного получения посадочного материала хвойных пород. По этой причине необходимо изучение различных генетических нарушений, возникающих в условиях in vitro, которые потенциально могут наследоваться получаемыми вегетативными потомками. В настоящей работе представлены результаты исследования сомаклональной изменчивости и уровня миксоплоидности каллусных колоний и регенерантов шести эмбриогенных линий ели европейской (Picea abies (L.) Karst.). На различных этапах культивирования соответствующего растительного материала in vitro использовалась питательная среда ½ LM, которая дополнялась сахарозой и глутамином, а также, при необходимости, регуляторами роста 2,4-Д, 6-БАП, АБК, ИМК и активированным углем. Микросателлитный анализ образцов проводился с использованием пяти EST-SSR-маркеров: Pa28, Pa33, Pa56, Pa47, Pa52. Показано, что в образцах трех из шести эмбриогенных линий по локусу Pa28 было выявлено более двух (три или четыре) аллельных вариантов. Кроме того, в ряде случаев изучаемые ткани имеют выраженные признаки миксоплоидии. Для сопоставления полученных данных проведен соответствующий микросателлитный анализ 33 естественно произрастающих средневозрастных деревьев ели европейской. Только у двух растений выявлены триплоидные клетки, что показывает значительно более низкий уровень геномных или хромосомных аберраций, чем в культурах in vitro.

The method of somatic embryogenesis could be used for industrial production of clonal planting material. For this reason special attention is paid to the studies of various genetic disorders that arise in vitro because of their possibility to be inherited by the vegetative offsprings. In our investigation the levels of somaclonal variability and mixoploidy in callus colonies and plantlets of six embryogenic lines of Norway spruce (Picea abies (L.) Karst.) were studied. ½ LM nutrient medium supplemented with sucrose and glutamine was used at different stages of plant tissues and plantlets in vitro cultivation. Growth regulators 2,4-D, 6-BAP, ABA, IMC and activated carbon were added to nutrient media if necessary. Microsatellite analysis of samples was carried out using five EST-SSR markers Pa28, Pa33, Pa56, Pa47, Pa52. It was shown that in samples of three of the six embryogenic lines, more than two (three or four) allelic variants were identified at the Pa28 locus. In a number of cases, the tissues studied have pronounced signs of mixoploidy. Appropriate microsatellite analysis of samples collected from 33 middle-aged trees of Norway spruce from naturally formed forest stand was additionally carried out in order to compare the results with the data obtained earlier. Only two plants showed the presence of triploid cells, indicating a significantly lower level of genomic or chromosomal aberrations than observed in in vitro cultures.

ель европейскаяэмбриогенные линиимикросателлитный анализсомаклональная изменчивостьмиксоплоидияNorway spruceembryogenic linesmicrosatellite analysissomaclonal variabilitymixoploidyReferencesКозубов, Г. М. Современные голосеменные: (морфолого-систематический обзор и кариология) / Г. М. Козубов, Е. Н. Муратова. – Л.: Наука, 1986. – 192 с.Kozubov G. M., Muratova E. N. Modern gymnosperms: (morphological and systematic review and karyology). Leningrad, Nauka Publ., 1986. 192 p. (in Russian).The Norway spruce genome sequence and conifer genome evolution / B. Nystedt, N. R. Street, A. Wetterbom [et al.] // Nature. – 2013. – Vol. 497, N 7451. – P. 579–584. https://doi.org/10.1038/nature12211Nystedt B., Street N. R., Wetterbom A., Zuccolo A., Lin Y.-Ch., Scofield D. G., Vezzi F. [et al]. The Norway spruce genome sequence and conifer genome evolution. Nature, 2013, vol. 497, no. 7451, pp. 579–584. https://doi.org/10.1038/nature12211Efficient Multi-Sites Genome Editing and Plant Regeneration via Somatic Embryogenesis in Picea glauca / Y. Cui, J. Zhao, Y. Gao [et al.] // Frontiers in Plant Science. – 2021. – Vol. 12. – Art. 751891. https://doi.org/10.3389/fpls.2021.751891Cui Y., Zhao J., Gao Y., Zhao R., Zhang J., Kong L. Efficient Multi-Sites Genome Editing and Plant Regeneration via Somatic Embryogenesis in Picea glauca. Frontiers in Plant Science, 2021, vol. 12, art. 751891. https://doi.org/10.3389/fpls.2021.751891Бородина, Н. А. Полиплоидия в интродукции древесных растений / Н. А. Бородина. – М.: Наука, 1982. – 176 с.Borodina N. A. Polyploidy in the introduction of woody plants. M., Nauka Publ., 1982. 176 p. (in Russian).Мацкевич, Н. В. Охрана редких генотипов лесных деревьев н кустарников / Н. В. Мацкевич. – М.: Агропромиздат, 1987. – 207 с.Matskevich N. V Protection of rare genotypes of forest trees and shrubs. M., Agropromizdat Publ., 1987. 207 p. (in Russian).Ohri, D. Polyploidy in Gymnosperms-A Reappraisal / D. Ohri // Silvae Genetica. – 2021. – Vol. 70, N 1. – P. 22–38. https://doi.org/10.2478/sg-2021-0003Ohri D. Polyploidy in Gymnosperms-A Reappraisal. Silvae Genetica, 2021, vol. 70, no. 1, pp. 22–38. https://doi.org/10.2478/sg-2021-0003Winton, L. L. Natural polyploidy in juvenile white and black spruce / L. L. Winton // Minnesota Forestry Notes. – 1964, N 144. – 2 p.Winton L. L. Natural polyploidy in juvenile white and black spruce. Minnesota Forestry Notes, 1964, no. 144. 2 p.Kiellander, C. L. Polyploidy in Picea abies / C. L. Kiellander // Hereditas. – 1950. – Vol. 36, N 3. – P. 513–516.Kiellander C. L. Polyploidy in Picea abies. Hereditas, 1950. vol. 36, no. 3, pp. 513–516.Ташев, А. Н. Число хромосом и хромосомные перестройки у ели обыкновенной Picea abies (L.) H. Karst. в лесах Рило-Родопского горного массива Болгарии / А. Н. Ташев, Т. С. Седельникова, А. В. Пименов // Сибирский лесной журнал. – 2015, № 5. – С. 77–86.Tashev A. N., Sedel’nikova T. S., Pimenov A. V. Chromosome number and chromosomal rearrangements in Norway spruce Picea abies (L.) H. Karst. in the forests of the Rila-Rhodope mountain range of Bulgaria. Sibirskii lesnoi zhurnal [Siberian Forest Journal], 2015, no. 5, pp. 77–86 (in Russian).Karyological and Cytogenetic Studies of Coniferous Plants Growing under Extreme Conditions / E. N. Muratova, T. S. Sedel’nikova, O. V. Goryachkina, A. V. Pimenov // Contemporary Problems of Ecology. – 2023. – Vol. 16, N 5. – P. 564–574. https://doi.org/10.1134/S1995425523050074Muratova E. N., Sedel’nikova T. S., Goryachkina O. V., Pimenov A. V. Karyological and Cytogenetic Studies of Coniferous Plants Growing under Extreme Conditions. Contemporary Problems of Ecology, 2023, vol. 16, no. 5, pp. 564–574. https://doi.org/10.1134/S1995425523050074Гуляева, Е. Н. Сомаклональная изменчивость у хвойных в культуре in vitro / Е. Н. Гуляева, Р. В. Игнатенко, Н. А. Галибина // Экологическая генетика. – 2020. – Т. 18, № 3. – С. 301–315.Gulyaeva E. N., Ignatenko R. V., Galibina N. A. Somaclonal variability in conifers in vitro culture. Ekologicheskaya genetika [Ecological Genetics], 2020, vol. 18, no. 3, pp. 301–315 (in Russian).Sarmast, M. K. Somaclonal Variation in Conifers / M. K. Sarmast, Z. R. Ghaleh, M. Alizadeh // Somaclonal Variation: Basic and Practical Aspects / ed. C. Sánchez-Romero. – Cham, 2024. – P. 123–142. https://doi.org/10.1007/978-3-031-51626-9_7Sarmast M. K., Ghaleh Z. R., Alizadeh M. Somaclonal Variation in Conifers. Somaclonal Variation: Basic and Practical Aspects. Cham, 2024, pp. 123–142. https://doi.org/10.1007/978-3-031-51626-9_7Megagametophyte in vitro tissue culture of Pinus sibirica and Larix sibirica and somaclonal variation / I. Tretyakova, A. Ivanitskaya, M. Park [et al.] // Proceedings of the 3rd International Conference of the IUFRO Unit 2.09.02 on “Woody plant production integrating genetic and vegetative propagation technologies”, Vitoria-Gasteiz, Spain, 8–12 September 2014 / eds.: Y. S. Park, J. M. Bonga. – 2015. – P. 45–57. – URL: https://www.iufro.org/media/fileadmin/publications/proceedings-archive/20902-vitoria-gasteiz14-proceedings.pdf (дата обращения: 10.02.2025).Tretyakova I., Ivanitskaya A., Park M., Voroshilova E., Oreshkova N., Krutovsky K. Megagametophyte in vitro tissue culture of Pinus sibirica and Larix sibirica and somaclonal variation. Proceedings of the 3rd International Conference of the IUFRO Unit 2.09.02 on “Woody plant production integrating genetic and vegetative propagation technologies”, Vitoria-Gasteiz, Spain, 8–12 September 2014. 2015, pp. 45–57. Available at: https://www.iufro.org/media/fileadmin/publications/proceedings-archive/20902-vitoria-gasteiz14-proceedings.pdf (accessed 10.02.2025).Cytogenetic Stability of Young and Long-Term Embryogenic Cultures of Larix sibirica / O. V. Goryachkina, M. E. Park, I. N. Tretyakova [et al.] // Cytologia. – 2018. – Vol. 83, N 3. – P. 323–329. https://doi.org/10.1508/cytologia.83.323Goryachkina O. V., Park M. E., Tretyakova I. N., Badaeva E. D., Muratova E. N. Cytogenetic Stability of Young and Long-Term Embryogenic Cultures of Larix sibirica. Cytologia, 2018, vol. 83, no. 3, pp. 323–329. https://doi.org/10.1508/cytologia.83.323Molecular evidence of true-to-type propagation of a 3-year-old Norway spruce through somatic embryogenesis / L. Harvengt, J. F. Trontin, I. Reymond [et al.] // Planta. – 2001. – Vol. 213, N 5. – P. 828–832. https://doi.org/10.1007/s004250100628Harvengt L., Trontin J. F., Reymond I., Canlet F., Paques M. Molecular evidence of true-to-type propagation of a 3-year-old Norway spruce through somatic embryogenesis. Planta, 2001, vol. 213, no. 5, pp. 828–832. https://doi.org/10.1007/s004250100628Survival and genetic stability of Picea abies embryogenic cultures after cryopreservation using a pregrowth-dehydration method / T. Hazubska-Przybyl, P. Chmielarz, M. Michalak [et al.] // Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC). – 2013. – Vol. 113. – P. 303–313. https://doi.org/10.1007/s11240-012-0270-2Hazubska-Przybyl T., Chmielarz P., Michalak M., Dering M., Bojarczuk K. Survival and genetic stability of Picea abies embryogenic cultures after cryopreservation using a pregrowth-dehydration method. Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC), 2013, vol. 113. pp. 303–313. https://doi.org/10.1007/s11240-012-0270-2Somatic embryogenesis and somaclonal variation in Norway spruce: morphogenetic, cytogenetic and molecular approaches / J. L. Fourre, P. Berger, L. Niquet, P. André // Theoretical and Applied Genetics. – 1997. – Vol. 94. – P. 159–169. https://doi.org/10.1007/s001220050395Fourre J. L., Berger P., Niquet L., Andre P. Somatic embryogenesis and somaclonal variation in Norway spruce: morphogenetic, cytogenetic and molecular approaches. Theoretical and Applied Genetics, 1997, vol. 94, pp. 159–169. https://doi.org/10.1007/s001220050395Genetic variation in microsatellite stability of somatic embryo plants of Picea abies: A case study using six unrelated full-sib families / A. Helmersson, G. Jansson, P. V. Bozhkov, S. Von Arnold // Scandinavian Journal of Forest Research. – 2008. – Vol. 23, N 1. – P. 2–11. https://doi.org/10.1080/02827580701820043Helmersson A., Jansson G., Bozhkov P. V., Von Arnold S. Genetic variation in microsatellite stability of somatic embryo plants of Picea abies: A case study using six unrelated full-sib families. Scandinavian Journal of Forest Research, 2008, vol. 23, no. 1, pp. 2–11. https://doi.org/10.1080/02827580701820043Litvay, J. D. Influence of a loblolly pine (Pinus taeda L.). Culture medium and its components on growth and somatic embryogenesis of the wild carrot (Daucus carota L.) / J. D. Litvay, D. C. Verma, M. A. Johnson // Plant Cell Reports. – 1985. – Vol. 4, N 6. – P. 325–328. https://doi.org/10.1007/bf00269890Litvay, J. D., Verma D. C., Johnson M. A. Influence of a loblolly pine (Pinus taeda L.). Culture medium and its components on growth and somatic embryogenesis of the wild carrot (Daucus carota L.). Plant Cell Reports, 1985, vol. 4, no. 6, pp. 325–328. https://doi.org/10.1007/bf00269890Морфогенез эмбриогенных культур ели европейской белорусского происхождения на различных этапах культивирования / М. П. Кусенкова, Т. Пшибул-Хазубска, Д. В. Кулагин [и др.] // Проблемы лесоведения и лесоводства: сб. науч. тр. / Ин-т леса НАН Беларуси. – Гомель, 2020. – Вып. 80. – С. 55–62.Kusenkova M. P., Pshibyl-Khazubska T., Kulagin D. V., Konstantinov A. V., Tret’yakova I. N., Pak M. E., Shuklina A. S., Pakhomova A. P., Padutov V. E. Morphogenesis of embryogenic cultures of Norway spruce of Belarusian origin at different stages of cultivation. Problemy lesovedeniya i lesovodstva: sbornik nauchnykh trudov [Problems of forestry and silviculture: collection of scientific papers]. Gomel, 2020, iss. 80. pp. 55–62 (in Russian).Кусенкова, М. П. Прорастание соматических эмбриоидов ели европейской, полученных при различной продолжительности культивирования эмбриогенного каллуса на питательных средах для созревания / М. П. Кусенкова // Проблемы лесоведения и лесоводства: сб. науч. тр. / Ин-т леса НАН Беларуси. – Гомель, 2021. – Вып. 81. – С. 169–177.Kusenkova M. P. Germination of somatic embryoids of Norway spruce obtained with different duration of cultivation of embryogenic callus on nutrient media for maturation. Problemy lesovedeniya i lesovodstva: sbornik nauchnykh trudov [Problems of forestry and silviculture: collection of scientific papers]. Gomel, 2021, iss. 81, pp. 169–177 (in Russian).Падутов, В. Е. Методы молекулярно-генетического анализа / В. Е. Падутов, О. Ю. Баранов, Е. В. Воропаев. – Мн.: Юнипол, 2007. – 176 с.Padutov V. E., Baranov O. Yu., Voropaev E. V. Methods of molecular genetic analysis. Minsk: Yunipol Publ., 2007. 176 p. (in Russian).Characterization of variable EST SSR markers for Norway spruce (Picea abies L.) / S. Fluch, A. Burg, D. Kopecky [et al.] // BMC Research notes. – 2011. – Vol. 4. – Art. 401. https://doi.org/10.1186/1756-0500-4-401Fluch S., Burg A., Kopecky D., Homolka A., Spiess N., Vendramin G. G. Characterization of variable EST-SSR markers for Norway spruce (Picea abies L.). BMC Research notes, 2011, vol. 4, art. 401. https://doi.org/10.1186/1756-0500-4-401Молекулярно-генетический анализ размноженных in vitro клонов Populus alba L. И Populus tremula L. c использованием микросателлитных маркеров / Т. А. Гродецкая, О. Ю. Баранов, С. Г. Ржевский [и др.] // Лесотехнический журнал. – 2021. – Т. 11, № 3. – С. 16–30.Grodetskaya T. A., Baranov O. Yu., Rzhevskii S. G., Fedulova T. P., Shabanova E. A., Konstantinov A. V., Mashkina O. S. Molecular genetic analysis of in vitro propagated clones of Populus alba L. and Populus tremula L. using microsatellite markers. Lesotekhnicheskii zhurnal [Forestry journal], 2021, vol. 11, no. 3, pp. 16–30 (in Russian).Баранов, О. Ю. Использование молекулярно-генетических маркеров для анализа плоидности осины и березы / О. Ю. Баранов, В. Балюцкас // Проблемы лесоведения и лесоводства: сб. науч. тр. / Ин-т леса НАН Беларуси. – Гомель, 2009. – Вып. 69. – С. 129–135.Baranov O. Yu., Balyutskas V. Use of molecular genetic markers for ploidy analysis of aspen and birch. Problemy lesovedeniya i lesovodstva: sbornik nauchnykh trudov [Problems of forestry and silviculture: collection of scientific papers]. Gomel, 2009, iss. 69, pp. 129–135 (in Russian).Development of novel EST-SSR markers for ploidy identification based on de novo transcriptome assembly for Misgurnus anguillicaudatus / B. Feng, S. V. Yi, M. Zhang, X. Zhou // PloS one. – 2018. – Vol. 13, N 4. – P. e0195829. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0195829Feng B., Yi S. V., Zhang M., Zhou X. Development of novel EST-SSR markers for ploidy identification based on de novo transcriptome assembly for Misgurnus anguillicaudatus. PloS one, 2018, vol. 13, no. 4, p. e0195829. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0195829Nuclear genome stability in long-term cultivated callus lines of Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn / A. Betekhtin, M. Rojek, J. Jaskowiak [et al.] // PloS One. – 2017. – Vol. 12, N 3. – P. e0173537. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173537Betekhtin A., Rojek M., Jaskowiak J., Milewska-Hendel A., Kwasniewska J., Kostyukova Y., Kurczynska E., Rumyantseva N., Hasterok R. Nuclear genome stability in long-term cultivated callus lines of Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn. PLoS One, 2017, vol. 12, no. 3, p. e0173537. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0173537Somaclonal Variation – Advantage or Disadvantage in Micropropagation of the Medicinal Plants / G. Duta-Cornescu, N. Constantin, D.-M. Pojoga [et al.] // International Journal of Molecular Sciences. – 2023. – Vol. 24, N 1. – Art. 838. https://doi.org/10.3390/ijms24010838Duta-Cornescu G., Constantin N., Pojoga D.-M., Nicuta D., Simon-Gruita A. Somaclonal Variation – Advantage or Disadvantage in Micropropagation of the Medicinal Plants. International Journal of Molecular Sciences, 2023, vol. 24, no. 1, art. 838. https://doi.org/10.3390/ijms24010838Шестибратов, К. А. Лесная биотехнология: методы, технологии, перспективы / К. А. Шестибратов, В. Г. Лебедев, А. И. Мирошников // Биотехнология. – 2008. – № 5. – С. 3–22.Shestibratov K. A., Lebedev V. G., Miroshnikov A. I. Forest biotechnology: methods, technologies and perspectives. Biotechnology in Russia, 2008, no. 5, pp. 1–34 (in Russian).Сомаклональная изменчивость Iris pseudacorus L. По данным RAPD- и цитогенетического анализа / М. М. Козыренко, Е. В. Артюхова, Е. В. Болтенков, Л. С. Лауве // Биотехнология. – 2004. – № 2. – С. 13–23.Kozyrenko M. M., Artyukhova E. V., Boltenkov E. V., Lauve L. S. Somaclonal variability of Iris pseudacorus L. according to RAPD and cytogenetic analysis. Biotechnology in Russia, 2004, no. 2, pp. 11–22 (in Russian).Taq DNA polymerase slippage mutation rates measured by PCR and quasi-likelihood analysis: (CA/GT)n and (A/T)n microsatellites / D. Shinde, Y. L. Lai, F. Z. Sun, N. Arnheim // Nucleic Acids Research. – 2003. – Vol. 31, N 3. – P. 974–980. https://doi.org/10.1093/nar/gkg178Shinde D., Lai Y. L., Sun F. Z., Arnheim N. Taq DNA polymerase slippage mutation rates measured by PCR and quasi-likelihood analysis: (CA/GT)n and (A/T)n microsatellites. Nucleic Acids Research, 2003, vol. 31, no. 3, pp. 974–980. https://doi.org/10.1093/nar/gkg178Галинская, Т. В. Предубеждения о микросателлитных исследованиях и как им противостоять / Т. В. Галинская, Д. М. Щепетов, С. Н. Лысенков // Генетика. – 2019. – Т. 55, № 6. – С. 617–632.Galinskaya T. V., Shchepetov D. M., Lysenkov S. N. Prejudices against microsatellite studies and how to resist them. Russian Journal of Genetics, 2019, vol. 55, no. 6, pp. 657–671 (in Russian). https://doi.org/10.1134/S1022795419060048Hematopoietic chimerism monitoring based on STRs: quantitative platform performance on sequential samples / D. Kristt, M. Israeli, R. Narinski [et al.] // Journal of Biomolecular Techniques. – 2005. –Vol. 16, N 4. – P. 378–389.Kristt D., Israeli M., Narinski R., Or H., Yaniv I., Stein J., Klein T. Hematopoietic chimerism monitoring based on STRs: quantitative platform performance on sequential samples. Journal of Biomolecular Techniques, 2005, no. 16, no. 4, pp. 378–389.Седельникова, Т. С. Изменчивость числа хромосом как фактор микроэволюции и адаптации хвойных / Т. С. Седельникова // Фактори експериментальної еволюції організмів. – 2016. – Т. 18. – С. 24–28.Sedel’nikova T. S. Variability of chromosome number as a factor of microevolution and adaptation of conifers. Faktori eksperimental’noї evolyutsії organіzmіv [Factors of experimental evolution of organisms], 2016, vol. 18, pp. 24–28 (in Russian).Князева, С. Г. Кариологический обзор хвойных растений на основе базы данных по хромосомным числам / С. Г. Князева, Е. Н. Муратова // Хвойные бореальной зоны. – 2010. – Т. 27, № 1–2. – С. 97–101.Knyazeva S. G., Muratova E. N. Karyological review of conifers based on the chromosome number database. Khvoinye boreal’noi zony [Conifers of the boreal zone], 2010, vol. 27, no. 1–2, pp. 97–101 (in Russian).Горячкина, О. В. Цитогенетические реакции хвойных растений в антропогенно нарушенных районах г. Красноярска и его окрестностей / О. В. Горячкина, О. А. Сизых // Хвойные бореальной зоны. – 2012. – Т. 30, № 1–2. – С. 46–51.Goryachkina O. V., Sizykh O. A. Cytogenetic reactions of coniferous plants in anthropogenically disturbed areas of Krasnoyarsk and its environs. Khvoinye boreal’noi zony [Conifers of the boreal zone], 2012, vol. 30, no. 1–2, pp. 46–51 (in Russian).Кунах, В. А. Геномная изменчивость соматических клеток растений / В. А. Кунах // Биополимеры и клетка. – 1995. – Т. 11. – № 6. – С. 5.Kunakh V. A. Genomic variability of plant somatic cells. Biopolimery i kletka [Biopolymers and the cell], 1995, vol. 11, no. 6, p. 5 (in Russian).Kumar, P. S. Chromosomal instability in callus culture of Pisum sativum / P. S. Kumar, V. L. Mathur // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. – 2004. – Vol. 78, N 3. – P. 267–271. https://doi.org/10.1023/B:TICU.0000025669.11442.3eKumar P. S., Mathur V. L. Chromosomal instability in callus culture of Pisum sativum. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 2004, vol. 78, no. 3, pp. 267–271. https://doi.org/10.1023/B:TICU.0000025669.11442.3eMishiba, K.-I. Ploidy distribution in the explant tissue and the calluses induced during the initial stage of internode segment culture of Asparagus officinalis L. / K.-I. Mishiba, K.-I. Tawada, M. Mii // In Vitro Cellular & Developmental Biology – Plant. – 2006. – Vol. 42, N 1. – P. 83–88. https://doi.org/10.1079/IVP2005724Mishiba K.-I., Tawada K.-I., Mii M. Ploidy distribution in the explant tissue and the calluses induced during the initial stage of internode segment culture of Asparagus officinalis L. In Vitro Cellular & Developmental Biology – Plant, 2006. vol. 42, no. 1, pp. 83–88. https://doi.org/10.1079/IVP2005724Шмаков, В. Н. Соматический эмбриогенез представителей рода Larix: состояние и перспективы / В. Н. Шмаков, Ю. М. Константинов // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2020. – Т. 24. – № 6. – С. 575–588.Shmakov V. N., Konstantinov Yu. M. Somatic embryogenesis of representatives of the genus Larix: status and prospects. Vavilovskii zhurnal genetiki i selektsii [Vavilov Journal of Genetics and Breeding], 2020, vol. 24, no. 6, pp. 575–588 (in Russian).Особенности соматического эмбриогенеза длительно пролиферирующих эмбриогенных клеточных линий Larix sibirica in vitro / И. Н. Третьякова, М. Э. Пак, А. С. Иваницкая, Н. В. Орешкова // Физиология растений. – 2016. – Т. 63, № 6. – С. 812–822.Tret’yakova I. N., Pak M. E., Ivanitskaya A. S., Oreshkova N. V. Features of somatic embryogenesis of long-term proliferating embryogenic cell lines of Larix sibirica in vitro. Fiziologiya rastenii [Plant Physiology], 2016, vol. 63, no. 6, pp. 812–822 (in Russian).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.