vestibИзвестия Национальной академии наук Беларуси. Серия биологических наукProceedings of the National Academy of Sciences of Belarus, Biological Series1029-89402524-230XThe Republican Unitary Enterprise Publishing House "Belaruskaya Navuka"10.29235/1029-8940-2019-64-4-467-471vestib-559Research ArticleСтатьиХроматографическая очистка ферментного препарата из культуральной жидкости Pleurotus ostreatusChromatographic purification of the enzyme preparation from the cultural liquid of Pleurotus ostreatusСаковичВ. В.SakovichV. V.

Сакович Валерия Васильевна – магистр биологических наук

ул. Днепровской флотилии, 23, 225710, г. Пинск

Valeryia V. Sakovich – Master of biological sciences

23, Dneprovskaya Flotiliya Str., 225710, Pinsk

mrs.valeryia@mail.ruГрушаА. М.HrushaA. M.

Груша Александр Михайлович – студент

ул. Днепровской флотилии, 23, 225710, г. Пинск

Aliaksandr M. Hrusha – Student

23, Dneprovskaya Flotiliya Str., 225710, Pinsk

grusha.alex.98@gmail.comРевенькоВ. В.RevenkoV. V.

Ревенько Вадим Вячеславович – студент

ул. Днепровской флотилии, 23, 225710, г. Пинск

Vadim V. Revenko – Student

23, Dneprovskaya Flotiliya Str., 225710, Pinsk

mrs.valeryia@mail.ruЖерносековД. Д.ZhernossekovD. D.

Жерносеков Дмитрий Данилович – кандидат биологических наук, доцент

ул. Днепровской флотилии, 23, 225710, г. Пинск

Dmitri D. Zhernossekov – D. Sc. (Biol.), Assistant Professor

23, Dneprovskaya Flotiliya Str., 225710, Pinsk

chemikdd@mail.ruПолесский государственный университетPolessky State University201907112019644467471Copyright © Сакович В.В., Груша А.М., Ревенько В.В., Жерносеков Д.Д., 20192019Сакович В.В., Груша А.М., Ревенько В.В., Жерносеков Д.Д.Sakovich V.V., Hrusha A.M., Revenko V.V., Zhernossekov D.D.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestibio.belnauka.by/jour/article/view/559

Проведена первичная очистка ферментного препарата, обладающего протеолитической активностью, из культуральной жидкости Pleurotus ostreatus. Использованы методы осаждения, диализа, ионообменной хроматографии на DEAEи KM-сефарозе. Установлено, что в результате хроматографии на KM-сефарозе ферментный препарат из культуральной жидкости разделяется на три фракции, одна из которых обладает молокосвертывающей активностью (МСА). Хроматография на DEAE-сефарозе позволила значительно очистить фермент, обладающий МСА.

The primary purification of the proteolytic enzyme preparation from the Pleurotus ostreatus culture fluid was carried out. Methods of salting out, dialysis, ion-exchange chromatography on DEAEand KM-sepharose were used. It was shown that during the chromatography on KM-sepharose, the enzyme preparation from the culture liquid was divided into three fractions, one of which possessed milk-clotting activity (МСА). Chromatography on DEAE-sepharose allowed us to reach the significant purity of the enzyme with МСА.

базидиомицетыпротеолитические ферментымолокосвертывающая активностьбэтч-методионообменникиbasidiomycetesproteolytic enzymesmilk-clotting activitybatch methodion exchangerReferencesДьяконова, Г. В. Исследование некоторых физико-химических свойств молокосвертывающих ферментов вешенки обыкновенной : автореф. дис. … канд. биол. наук : 03.01.04 / Г. В. Дьяконова ; Юж. федер. ун-т. – Ростов н/Д, 2010. – 23 с.Diakonova G. V. Investigation of some physical and chemical properties of milk-clotting enzymes of common oyster mushroom. Abstract of Ph. D. diss. Rostov na Donu, 2010. 23 p. (in Russian).Caseinolytic and milk-clotting activities from Moringaoleifera flowers / E. V. Pontual [et al.] // Food Chem. – 2012. – Vol. 135, N 3. – P. 1848–1854. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.06.087Pontual E. V., Carvalho B. E. A., Bezerra R. S., Coelho L. C. B. B., Napoleão T. H., Paiva P. M. G. Caseinolytic and milk-clotting activities from Moringaoleifera flowers. Food Chemistry, 2012, vol. 135, no. 3, pp. 1848–1854. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2012.06.087Enzymatic milk clotting activity in artichoke (Cynara scolymus) leaves and alpine thistle (Carduus defloratus) flowers. Immobilization of alpine thistle aspartic protease / M. Esposito [et al.] // Food Chem. – 2016. – Vol. 204. – P. 115–121. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.02.060Esposito M., di Pierro P., Dejonghe W., Mariniello L., Porta R. Enzymatic milk clotting activity in artichoke (Cynara scolymus) leaves and alpine thistle (Carduus defloratus) flowers. Immobilization of alpine thistle aspartic protease. Food Chemistry, 2016, vol. 204, pp. 115–121. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2016.02.060Purification, characterization and functional role of novel extracellular protease from Pleurotus ostreatus / G. Palmieri [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. – 2001. – Vol. 67, N 6. – P. 2754–2759. https://doi.org/10.1128/aem.67.6.2754-2759.2001Palmieri G., Bianco C., Cennamo G., Giardina P., Marino G., Monti M., Sannia G. Purification, characterization and functional role of novel extracellular protease from Pleurotus ostreatus. Applied and Environmental Microbiology, 2001, vol. 67, no. 6, pp. 2754–2759. https://doi.org/10.1128/aem.67.6.2754-2759.2001Purification and characterization of a milk-clotting aspartic protease from Withaniacoagulans fruit / M. Salehi [et al.] // Int. J. Biol. Macromolecules. – 2017. – Vol. 98. – P. 847–854. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.02.034Salehi M., Aghamaali M. R., Sajedi R. H., Asghari S. M., Jorjani E. Purification and characterization of a milk-clotting aspartic protease from Withaniacoagulans fruit. International Journal of Biological Macromolecules, 2017, vol. 98, pp. 847–854. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2017.02.034Лебедева, Г. В. Выделение и характеристика фермента сычужного действия из плодовых тел вешенки обыкновенной / Г. В. Лебедева, М. Т. Проскуряков, М. А. Кожухова // Изв. высш. учеб. заведений. Пищевая технология. – 2008. – № 1. – С. 114–115.Lebedeva G. V., Proskuryakov M. T., Kozhukhova M. A. Isolation and characterization of rennet action from the fruit bodies of oyster mushroom. Izvestiya vysshikh uchebnykh zavedenii. Pishchevaya tekhnologiya = Food technology, 2008, no. 1, pp. 114–115 (in Russian).Сакович, В. В. Подбор оптимальных питательных сред и условий глубинного культивирования на эффективность выращивания вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus) / В. В. Сакович, Д. Д. Жерносеков // Актуальні питання біологічної науки : ІV Міжнар. заочна наук.-практ. конф., присв. 100-річчю від дня народження акад. П. Г. Богача, 12 квіт. 2018 р. : зб. ст. / Ніжин. держ. ун-т ; ред. кол. : М. Давіташвілі [та ін.]. – Ніжин, 2018. – С. 88–89.Sakovich V. V., Zhernosekov D. D. Selection of optimal culture media and conditions of deep cultivation for the effectiveness of cultivation of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus). Aktual’ni pytannja biologichnoi nauky: IV Mizhnarodna zaochna naukovo-praktychna konferencija, prysvechana 100-richchju vid dnja narodzhennja akademika P. G. Bogacha (12 kvitnja 2018 roku, Nizhyn): zbirnyk statej [Actual questions of biological science: IV International correspondence scientificpractical conference, dedicated to the 100th anniversary of the birth of academician P. G. Bogachy (April 12, 2018, Nizhyn): a collection of articles]. Nizhyn, 2018, pp. 88–89 (in Russian).Сакович, В. В. Влияние экстракта мицелия и культуральной жидкости вешенки обыкновенной (Pleurotus ostreatus) на формированеи сырного сгустка / В. В. Сакович, О. Н. Жук // Научный потенциал молодежи – будущему Беларуси : материалы XI Междунар. молод. науч.-практ. конф., Пинск, 7 апр. 2017 г. : в 2 ч. / Полес. гос. ун-т ; редкол. : К. К. Шебеко (гл. ред.) [и др.]. – Пинск, 2017. – Ч. 1. – С. 340–342.Sakovich V. V., Guk O. N. Effect of mycelium extract and common oyster culture fluid (Pleurotus ostreatus) on the formation of cheese clot. Nauchnyi potentsial molodezhi – budushchemu Belarusi: materialy XI mezhdunarodnoi molodezhnoi nauchno-prakticheskoi konferentsii (Pinsk, 7 aprelya 2017 goda). Chast’ 1 [The scientific potential of young people – the future of Belarus: materials of the XI International Youth scientific and practical conference (Pinsk, April 7, 2017). Part 1]. Pinsk, 2017, pp. 340–342 (in Russian).Сакович, В. В. Разработка методов очистки фермента, обладающего молокосвертывающей активностью из Pleurotus ostreatus / В. В. Сакович, А. М. Груша, Д. Д. Жерносеков // Современные проблемы биохимии и молекулярной биологии : материалы II Белорус. биохим. конгресса (г. Гродно, 17–18 мая 2018 г.) / ред. : И. Н. Семененя, А. Г. Мойсеенок. – Минск, 2018. – С. 507–511.Sakovich V. V., Grusha A. M., Zhernosekov D. D. Development of methods for purification of the enzyme. with milk-converting activity from Pleurotus ostreatus. Sovremennye problemy biokhimii i molekulyarnoi biologii: sbornik nauchnykh statei II Belorusskogo biokhimicheskogo kongressa (Grodno, 17–18 maya 2018 goda) [Modern problems of biochemistry and molecular biology: a collection of scientific articles of the II Belarusian biochemical congress (Grodno, May 17–18, 2018)]. Minsk, 2018, pp. 507–511 (in Russian).Секретируемая металлопротеиназа Bacillus intermedius: получение гомогенного препарата фермента и исследование физико-химических свойств / Н. Л. Рудакова [и др.] // Уч. зап. Казан. гос. ун-та. Сер. Естеств. науки. – 2010. – Т. 152, № 2. – С. 145–154.Rudakova N. L. Sabirova A. R., Kayumov A. R., Mardanova A. M., Balaban N. P., Sharipova M. R. Secreted metalloproteinase Bacillus intermedius: preparation of a homogeneous enzyme preparation and investigation of physical and chemical properties. Uchenye zapiski Kazanskogo universiteta. Seriya Estestvennye nauki [Scientific notes of the Kazan University. Series Natural Sciences], 2010, vol. 152, no. 2, pp. 145–154 (in Russian).ГОСТ ISO 11815-2015. Молоко. Определение общей молокосвертывающей активности говяжьего сычужного фермента. – М. : Стандартформ, 2015. – 10 с.GOST ISO 11815-2015. Milk. Determination of total milk-clotting activity of bovine rennet. Moscow, Standartinform Publ., 2015. 10 p. (in Russian).Никандров, В. Н. Методы исследования протеолиза. / В. Н. Никандров, Н. С. Пыжова // Современные проблемы биохимии : методы исследований / Е. В. Барковский [и др.] ; под ред. А. А. Чиркина. – Минск, 2013. – Гл. 5. – С. 132–157.Nikandrov V. N., Pyzhova N. S. Research methods of proteolysis. Chapter 5. Sovremennyye problemy biokhimii: metody issledovanii [Modern problems of biochemistry: research methods]. Minsk, 2013, pp. 132–157 (in Russian).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.